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Trizol柱纯化试剂盒DIY的方法

Trizol试剂是基于异硫氰酸胍/酚法的一种即用型的从不同类型的样本中提取总RNA的试剂,Trizol纯化RNA既不限制样本种类也不限制起始样本量,是实验室最常用的RNA纯化方法。但是用Trizol试剂纯化RNA的不足之处在于需要很长的离心和RNA干燥时间,并且纯度通常还比过柱纯化获得的RNA来的更差。

所以在RNA纯化柱随处可得的情况下,自制Trizol柱纯化试剂盒不失为提升工作效率和工作质量的好方法。我们来看一下怎么在实验室自己进行Trizol柱纯化吧。

自备试剂

(1) Trizol试剂

(2) RNA纯化柱(购自Simgen RNA纯化柱,Cat. No. 7301050

(3) 70%乙醇

(4) DEPC处理水

实验仪器与耗材

(1) RNase-free 1.5 ml离心管和移液器及吸头

(2) 台式小量离心机(可配离心1.5 ml离心管和2 ml离心管的转子)

(3) 液氮与研钵

操作方法:

(1) Trizol 方法操作至离心分相,进入以下操作步骤

(2) 吸取上层水相转移到一个洁净的1.5 ml 离心管中,加入等体积的70%乙醇,勿弃吸头,直接用吸头吸注两次混匀,吸取600 μl混合液转移到核酸纯化柱(核酸纯化柱置于2 ml 离心管中)中,盖上管盖,12000 rpm 离心30秒。

(3) 2 ml 离心管中的滤液,将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中,将1.5 ml 离心管中剩余的液体全部入核酸纯化柱中,盖上管盖,12000 rpm 离心30秒。

(4) 2 ml 离心管中的滤液,将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中,在核酸纯化柱中加入700 μl 70%乙醇,12000 rpm 离心30(最好重复洗涤一次)

(5) 2 ml 离心管中的滤液,将核酸纯化柱置回到2 ml 离心管中,14000 rpm 离心1分钟。

(6) 2 ml 离心管,将核酸纯化柱置于一个RNase-free1.5 ml离心管中,在纯化柱中加入50 -100 μl DEPC处理水,盖上管盖,室温静置1分钟,12000 rpm 离心30秒。

(7) 弃纯化柱,洗脱的RNA可立即用于各种分子生物学实验;或者将RNA储存于-70℃备用。

使用效果:

DIYTrizol柱纯化试剂盒提取的大肠杆菌RNA的电泳图

第一条泳道是DL 2000 Ladder Marker5 μl

第二、三泳道是Trizol柱纯化方法纯化的细菌RNA8 μl

用分光光度计测得的RNA数据:

 

新景生物实验室