粪便DNA纯化试剂盒应用案例

作者:新景实验室
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一、实验目的:

检测使Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA能否进行PCR扩增。

二、PCR检测操作步骤

1.取一个0.6ml离心管,加入140μl2×Taq Plus PCR Master Mix,再加入14μl细菌16s引物(正向、反向引物各7μl),最后加入91μl超纯水,混合均匀。

2.按每管35μl的体积将步骤1的混合物分装到6PCR管中,再分别加入5μl超纯水(阴性对照)、5μl Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA()5μl细菌DNA(阳性对照)。

3.扩增条件 

94℃,5min

{94℃,45sec55℃,45sec72℃,1min30sec}×30cycles

72℃,10min

4.下图内容进行电泳检测:

 

三、电泳结果:

 

1-4Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的DNA同一粪便样本)             5:阴性对照扩增产物   

6-9Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的DNA作为模板的扩增产物       10:阳性对照扩增产物

四、实验结论:

1. 1-4电泳结果分析Simgen粪便DNA纯化试剂盒成功提取到了粪便DNA,提取的DNA存在明显降解,不过还是能明显看到主条带

2. 5-10电泳结果分析,提取的粪便DNA成功扩增出了条带条带清晰明显,与阳性对照一致,说明Simgen粪便DNA纯化试剂盒提取的粪便DNA洁净度高,所含抑制物少。

综上所述:使Simgen粪便DNA纯化试剂盒所获得的核酸抑制物及杂质少,能够满足后续PCR扩增实验的需求