一、材料：
1. 样品：
由厦门**商贸有限公司提供。
2. 动物组织DNA试剂盒（Simgen，Cat.No.3101050）
4. PCR扩增试剂、引物、探针为杭州新景生物试剂开发有限公司自配或委托上海**生物技术有限公司合成。
5. PCR仪：ABI PRISM® 7500 Sequence DeteCtion System
6. 离心机：Thermo Biofuge pico
二、方法：
1. 用Simgen动物组织DNA试剂盒分离纯化鱼排粉中的DNA。
2. 按下列组分配制PCR检测试剂( 40 μl反应体系)：
Master Mix(2×) 20.0 μl
上游引物FP 1.0 μl
下游引物RP 1.0 μl
探针Probe 0.5 μl
50× ROX 0.8μl
ddH2O 11.7 μl
向每个PCR反应管中加入35 μl反应混合液，再加入5μl分离纯化的DNA进行RT-PCR检测。
注：阳性对照用鸡DNA作为模板，阴性对照用ddH2O作为模板。
3. PCR循环条件设置： 95℃ 1min→40×（95℃ 15s→60℃ 30s）
三、结果判定：
1．有效性原则
阴性对照：无FAM荧光信号检出，未出现典型的扩增曲线。
阳性对照：有FAM荧光信号检出，并出现典型的扩增曲线。
以上要求必须同时满足，否则本次检测无效。
结果：
1. 送检的样品检测到鸡源DNA组分。
2. 结果分析：
① 送检样品和阳性对照均起线，阴性对照未起线，阳性对照CT值为15.213，送检样品CT值分别为32.681,33.385。故所检测鱼排粉样品中含有鸡源DNA。
② 注意：本基因检测仅能检测到鸡源DNA组分，不能检测到其他鸟类的DNA组分，即样品中若含有鸭、鹅等DNA组分，也是无法检测出的。
Ct值报告截图如下：
荧光PCR扩增曲线截图如下：
