1、取出细胞、收集上清保存备用 
2、用冷PBS冲洗细胞两次 
3、加入 1ml RNAisol（24孔板每孔加0.5ml即可），调小刻度用移液器吹打细胞至液体澄清（生化：摇动混匀后室温孵育10min） 
4、将裂解液转移至1.5ml灭酶EP管中，用黄枪头加入氯仿0.2ml（1/5 RNAisol体积），用手剧烈震摇15秒，置室温5min（生化：3min dxyer：15min），分层 
5、 4℃、12000g（12300rcf）离心15min，可见分层。 
6、用黄枪头小心收集上层水相约0.5ml置于另一1.5ml灭酶EP管中（确保不要吸入中间层和有机相）。 
7、各管分别加入0.5ml 异丙醇（等体积），用力摇匀，置室温10min。（提前将异丙醇4℃预冷，或混匀后置-20℃60min，提取效果更好） 
8、 4℃、 12000g离心10min，可见RNA沉淀。 
9、倒弃上清，用滤纸吸干管口余液，加入预冷的75%灭酶异醇1ml，用指轻弹管壁使RNA沉淀飘起洗涤。
10、4℃、7500g（7700rcf）离心5min，生化为10min，（亦有dxyer用 12000g），沉淀即为总RNA。
11、弃上清，真空干燥约4min或空气中干燥5~10min，加入20μl（30μl）DEPC 水。 
12、56℃水浴小于10min助溶，取少量测OD值，其余-70℃保存备