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核酸纯化

核酸纯化柱

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Carrier RNA

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产品序号:4003101 / 4003130

规格价格
1ml650
30ml17500

Carrier RNA 是片段在200~3000 nt之间的RNA混合物,溶解于RNA保护剂。

在柱纯化核酸纯化体系中添加Carrier RNA,可提高10倍以上微量核酸的回收效率。

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Carrier RNA 是片段在200 -3000 nt之间的RNA混合物,溶解于RNA保护剂(Simgen产品序号:4003230)中,浓度为6 μg/μl

产品介绍
在柱纯化微量核酸的过程中,如病毒RNA纯化、病毒DNA纯化及微量DNA提取等实验,微量的核酸在纯化柱上的结合和洗脱效率降低,导致不能回收到足够的PCR模板,最终使检测失败。在柱纯化核酸纯化体系中添加Carrier RNA,可提高10倍以上微量核酸的回收效率,同时由于Carrier RNA的存在,还可特别保护微量的RNA模板,减少RNA酶的对微量RNA模板的攻击机率。Carrier RNA是微量RNA纯化(如病毒RNA纯化)中不可缺少的组成成份。 

使用方法

在微量核酸纯化的每次纯化体系的裂解液中加入1-5 μl Carrier RNA。最后获得的含有Carrier RNA的微量核酸可直接用于PCRRT-PCR反应。

                      Carrier RNA的存在对血浆游离核酸纯化效率的影响 

实验目的:在实验中设计Carrier RNA的添加与否以探究其对小片段核酸纯化的回收效率的影响

实验材料及设备:

血浆游离核酸纯化试剂盒(simgen)、Carrier RNA(simgen)血浆(购自浙江省血液中心)、无水乙醇动物源性检测试剂盒(猪源)(simgen

样本:猪源的扩增产物(引物Forward CGACAAAGCAACCCTCACAC;引物Reverse TGCGAGGGCGGTAATGAT长度为70 bpBuffer TE稀释10000倍后再用血浆稀释1000倍作为含有游离核酸的血浆样本

设备:ABI 7000 荧光PCR仪、漩涡震荡仪、水浴锅、离心机及移液

其他耗材:1.5ml离心管、八连排PCR管,RNase-free吸头,一次性手套及防护用品和纸巾。 

实验方法:

1、 根据simgen血浆游离核酸纯化试剂盒的说明书的操作步骤,按照下列方案进行操作,提取DNA

编号

试剂(μl

①②

③④

⑤⑥

⑦⑧

蛋白酶K

20

20

80

80

体液样本

200

200

800

800

Carrier RNA

5

0

10

0

Buffer VL

200

200

800

800

无水乙醇

320

320

1280

1280

Buffer TE

50

50

50

50

注:编号14为体液为200 μl时,且在Carrier RNA加与不加时对扩增的影响,同时将体液样品扩大4倍即编号58,探究Carrier RNA加与不加的影响。

 

2、 用simgen的动物源性检测试剂盒(猪源)配制PCR混合液,将取得的8管DNA按照5 μl/管加入到PCR反应体系混合液中,进行荧光PCR扩增,观察实验结果。 

实验结果:

                         1200ul体液样本的扩增曲线 

 

2800ul体液样本的扩增曲线

 

讨论与分析

1. 从图1分析:加入Carrier RNA1号和2CT值比3小约1.5CT值;比4号小约3.5CT值。说明该核酸纯化体系中,如果不含Carrier RNA,痕量核酸的回收效率会变得不稳定,是加入Carrier RNA的核酸纯化体系回收效率的1/101/3

2. 从图2分析:加入Carrier RNA5号和6CT值比78号小约3.3CT值。说明该核酸纯化体系中,如果不含Carrier RNA,则会是加入Carrier RNA的核酸纯化体系回收效率的1/10左右。

3. 小片段(本实验是70bp痕量DNApg级别)用柱纯化回收的过程中,Carrier RNA的加入,能显著提高回收效率。

使用simgen carrier RNA发表的论文

1.Development of Magnetic Nanoparticles Based Nucleic Acid Extraction Method and Application in Hepatitis C Virus Chemiluminescent Detection

Z Ali, W Liang, L Jin, Y Tang, X Mou… - Science of Advanced …, 2015 - ingentaconnect.com

 

2.Integration of Nucleic Acid Extraction Protocol with Automated Extractor for Multiplex Viral Detection

Z Ali, J Wang, X Mou, Y Tang, T Li… - … of Nanoscience and …, 2017 - ingentaconnect.com

 



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