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Taq DNA Polymerase【10 × PCR Buffer (Mg2+ free )】

Taq DNA Polymerase是从含Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的重组E.coli菌株中分离纯化的热稳定蛋白,分子量约90 KD。具有5’→3’聚合酶活性和双链特异性的5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。
Taq DNA Polymerase PCR产物为3’单个A粘末端,可直接与TA载体连接。

序号 规格 价格 购买

8014050 50μl ¥100 立即购买

8014250 250μl ¥400 立即购买

产品介绍

Taq DNA Polymerase是从含Thermus aquaticus DNA Polymerase基因的重组E.coli菌株中分离纯化的热稳定蛋白,分子量约90KD。具有5’→3’聚合酶活性和双链特异性的5’→3’外切酶活性,无3’→5’外切酶活性。

Taq DNA Polymerase PCR产物为3’单个A粘末端,可直接与TA载体连接。

单位定义

7430min,使10 nm dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活力单位。

活性检测条件:50 mM Tris-HClpH 9.0, 25℃,50 mM NaCl, 5 mM MgCl2,0.2 mM each dNTPs(包括[3H]-Dttp), 200 μg/ml活化的小牛胸腺DNA0.1 mg/ml BSA

质量控制

SDS-PAGE 检测纯度大于99%。经检测无外源核酸酶活性,PCR方法检测无宿主DNA残留,能有效扩增人类基因组中的单拷贝基因。

PCR体系成分

1. 模板DNA的纯度:很多残留的核酸提取试剂会影响PCR反应,包括蛋白酶、蛋白变性剂(比如SDS、胍盐)、高浓度盐(KAcNaAc、辛酸钠等)和高浓度EDTA等。纯度不高的模板(比如煮沸法获取的模板)用量请勿超过PCR反应体系的1/10(比如50 μl反应体系中加入模板的体积不应超过5μl)。如果模板DNA纯度太差,可使用Simgen DNA纯化试剂盒(Cat. No.2101050)对模板DNA进行纯化及浓缩。经Simgen DNA纯化试剂盒纯化后的模板使用量可多至PCR反应体系体积的1/2

2.  模板DNA用量:极微量的DNA也可以作为PCR摸板,但为保证反应的稳定性,50 μl体系建议使用104拷贝以上的靶序列作为模板。模板DNA的推荐使用量:

人基因组DNA0.05 μg~0.5 μg/50 μl PCR反应体系

大肠杆菌基因组DNA10 ng~100 ng/50 μl PCR反应体系

λ DNA0.5 ng~5 ng/50 μl PCR反应体系

质粒DNA: 0.1ng ~ 10 ng/50 μl PCR反应体系

如需用扩增产物作为模板再扩增,应至少将扩增产物稀释1,00010,000倍后再作为模板使用,否则可能会出现涂抹条带或无特异性条带。

3. 引物浓度:一般每条引物配制的浓度为10 μM (50×),工作浓度为0.2 μM。引物过量可能会出现非特异性扩增,引物过少则可能会降低扩增效率。

4. Mg2+浓度:Mg2+浓度对Taq酶的活性影响非常大,一般终浓度范围在1.5 mM~5 mM之间。Mg2+浓度过高可能会出现非特异性扩增,Mg2+浓度过低则可能会降低扩增效率。